Departamento de Fisiopatología

HOSPITAL DE CLÍNICAS "Dr. Manuel Quintela" - FACULTAD DE MEDICINA - UNIVERSIDAD DE LA REPÚBLICA

Inmunohematología

Centros de interés temáticos de nuestro grupo

1. Leucemia Linfoide Crónica

La Leucemia Linfoide Crónica (LLC) es el tipo de leucemia más común en personas adultas de países occidentales. Se caracteriza por la acumulación lenta y progresiva de linfocitos pequeños de aspecto maduro y fenotipo B, resultante de un complejo balance entre proliferación y muerte celular. Su etiología es aún desconocida y presenta una evolución extremadamente variable con una sobrevida que puede ir de unos meses a décadas. Aunque la incorporación de nuevas drogas y anticuerpos monoclonales han modificado el curso clínico de la enfermedad, la LLC sigue siendo una enfermedad incurable. Nuestro interés en la LLC se ha centrado en el estudio de la expresión génica en linfocitos B malignos. Con esto pretendemos conocer aspectos de la etiopatogenia que puedan explicar el comportamiento biológico de estas células.

2. Proceso de transformación maligna

La Leucemia Bovina Enzoótica es un modelo de leucemia que comparte algunas características con la LLC humana. Esta leucemia bovina es causada por el Virus de la Leucosis Bovina (VLB), un retrovirus cuyo genoma se integra de forma persistente al genoma de la célula infectada. Este modelo biológico nos interesa con el objetivo de profundizar en el conocimiento del proceso de transformación maligna de etiología infecciosa. Por otro lado, es de nuestro interés el estudio de la interacción del sistema inmune del hospedero tanto con el VLB como con las células transformadas por la infección viral.

 

Integrantes del grupo

  • Sergio Bianchi (Depto. de Fisiopatología, Hospital de Clínicas; Instituto Pasteur de Montevideo).
    Otto Pritsch (Depto. de Inmunobiología, Fac. de Medicina; Instituto Pasteur de Montevideo).
    Gonzalo Moratorio (Laboratorio de Virología Molecular, Fac. de Ciencias; Instituto Pasteur de Montevideo).
    Gonzalo Obal (Depto. de Inmunobiología, Fac. de Medicina; Instituto Pasteur de Montevideo).
    Lorena Tomé (Depto. de Inmunobiología, Fac. de Medicina; Instituto Pasteur de Montevideo).
    Gonzalo Rama (Instituto Pasteur de Montevideo).
    Federico Carrión (Instituto Pasteur de Montevideo).

 

Publicaciones Recientes

Immunoglobulin heavy chain V-D-J gene rearrangement and mutational status in Uruguayan patients with chronic lymphocytic leukemia. Bianchi S, Moreno P, Landoni AI, Naya H, Oppezzo P, Dighiero G, Gabús R, Pritsch O. Leuk Lymphoma. 2010 Nov;51(11):2070-8.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20929321

 

Phylogenetic analysis of bovine leukemia viruses isolated in South America reveals diversification in seven distinct genotypes. Moratorio G, Obal G, Dubra A, Correa A, Bianchi S, Buschiazzo A, Cristina J, Pritsch O. Arch Virol. 2010 Apr;155(4):481-9.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20169372

Sergio Bianchi, Guillermo Dighiero and Otto Pritsch.
Selected Topics in Chronic Lymphocytic Leukemia Pathogenesis.
Chronic Lymphocytic Leukemia, chapter 1, pp3-18 (2012). Ed.: Pablo Oppezzo. InTech publisher, ISBN: 978-953-307-881-6.

Pósters

Respiratorio


Área de Investigación Respiratoria (AIR)

Las patologias respiratorias, tanto agudas como crónicas, tienen una alta prevalencia, con una morbi-mortalidad creciente y ocasionan cada vez mayores gastos al sistema de salud. Tanto en pacientes que requieren Asistencia Respiratoria Mecánica como en aquellos con severa obstrucción bronquial, es frecuente observar altos niveles de anhídrido carbónico en plasma (hipercapnia).
Nuestro grupo de trabajo desarrolla sus líneas de investigación enfocadas en el efecto del CO2 sobre las funciones del epitelio alveolar y los músculos respiratorios.
Para este fin hemos desarrollado una plataforma de estudio en modelos animales que incluyen: análisis de la reabsorción de líquido alveolar, estudio de las propiedades tensoactivas y organización supramolecular del surfactante pulmonar y evaluación de la contractilidad diafragmática.
Al presente, mantenemos diferentes líneas de trabajo con proyectos financiados, maestrías y doctorados utilizando esta infraestructura.
Al mismo tiempo hemos iniciado nuestras primeras experiencias en Medicina Traslacional a través de proyectos de aplicación clínica e interacción con otros grupos de trabajo.


INTEGRANTES

  • Dr. Aturo Briva (PhD)
  • Lic. Leonel Malacrida (PhD, DT- Post-Doc at the Laboratory for Fluorescence Dynamics, UCI-USA)
  • Dr. Martín Angulo (MSc Student)
    Dr. Luciano Amarelle (Research Fellow at the Northwestern University-USA)
    Dra. Maria Noel Marin
    Lic. Rosina Toledo Gallo (Bioquímica)
    Dr. Matías Iglesias
    Lic. María Jose García (Bioquímica)
    Br. Claudio Pereira (Bioquímica)

 

LINEAS DE INVESTIGACIÓN (en curso)

Medicina Traslacional Respiratoria. Mecanismos y estrategias terapéuticas aplicadas a la Lesión Pulmonar. Responsable: Dr. Arturo Briva (PhD)


- Organización Surpramolecular y funcional del Surfactante Pulmonar en la Evolución: Diseño de nuevas mezclas terapeuticas patología-específicas. Responsable: Leonel Malacrida (PhD).

- Maduaración y secrecion de los cuerpos lamelares (LBs) en células A549: Hidratación y organización supramolecular in vivo. Resposable: Leonel Malacrida (PhD)

Disfunción y Regeneración Muscular en la Injuria Pulmonar. Resposable: Dr. Martin Angulo



PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN (actuales y anteriores)


CÉLULAS MADRE Y SISTEMA UBIQUITINA-PROTEASOMA: ROL EN LA ATROFIA Y
REGENERACIÓN MUSCULAR TRAS LA LESIÓN PULMONAR AGUDA E HIPERCAPNIA.
Responsable: Dr. Martin Angulo. (FCE-ANII 2014-2016)

- DEBILIDAD MUSCULAR EN EL SÍNDROME DE DISTRÉS RESPIRATORIO AGUDO:
ESTUDIO FUNCIONAL Y BIOMARCADORES.
Responsable: Dr. Martin Angulo. (I+D-CSIC 2015-2017)

- MEDICINA TRASLACIONAL RESPIRATORIA. MECANISMOS Y ESTRATEGIAS TERAPÉUTICAS APLICADAS A LA LESIÓN PULMONAR.

Financiación CSIC Grupos de Investigación 2014, Responsable: Dr. Arturo Briva (PhD)

- Buscando en la evolución estrategias terapéuticas para la lesión pulmonar: ¿Existe un surfactante pulmonar terapéutico patología específico?
Financiación ANII Becas de Iniciación, Responsable: Rosina Toledo, Tutor: Leonel Malacrida y Arturo Briva

-Surfactante Pulmonar durante la Lesión Pulmonar Aguda: Abordaje funcional estructural y terapéutico.

Financiación CSIC I+D 2012 Investigador responsable: Lic. Leonel Malacrida.

-Caracterización del daño epitelial en la lesión pulmonar aguda
Financiación ANII FMV 2012 Investigador responsable:  Dr. Arturo Briva.

-Rol de la vía purinérgica en la injuria pulmonar. Modulación por la hipercapnia. (A. Briva - Proyecto CSIC I+D 2008)

-Rol del calcio intracelular en la disfuncion del epitelio alveolar inducida por la hipercapnia. (A. Briva - Proyecto FCE I+D 2008)

-Efecto de los agonistas beta adrenergicos sobre el deterioro de la reabsorción del fluido alveolar inducido por hipercapnia. (A. Briva - Proyecto CSIC I+D 2006)

-Estudio de los mecanismos implicados en la disfunción diafragmática vinculada a obstrucción crónica de la vía aérea.
(M. Angulo - Proyecto Maestría PROINBIO y CSIC I mod II 2009)

-Interacciones lípido-proteína en el sistema surfactante pulmonar y su rol en la lesión pulmonar aguda.
(L. Malacrida - Proyecto de Maestría PEDECIBA y CSIC I 2004)

-Evaluación del rol de la hipercapnia en la respuesta inflamatoria en un modelo de sepsis experimental.
(J.P. Soto Proyecto de Maestría PROINBIO)

-Rol del surfactante en la lesión pulmonar aguda inducida por la ventilación mecánica.
(F. Roccicchioli - Proyecto CSIC I mod II 2009)

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PUBLICACIONES MAS RELEVANTES

 

High CO2 Levels Cause Skeletal Muscle Atrophy via AMP-activated Kinase (AMPK), FoxO3a Protein, and Muscle-specific Ring Finger Protein 1 (MuRF1).
Jaitovich A, Angulo M, Lecuona E, Dada LA, Welch LC, Cheng Y, Gusarova G, Ceco E, Liu C, Shigemura M, Barreiro E, Patterson C, Nader GA, Sznajder JI.

J Biol Chem. 2015 Apr 3;290(14):9183-94.


Sevoflurane anesthesia deteriorates pulmonary surfactant promoting alveolar collapse in male Sprague-Dawley rats.
Malacrida L, Reta G, Piriz H, Rocchiccioli F, Botti H, Denicola A, Briva A.
Pulm Pharmacol Ther
. 2014 Jan 3. pii: S1094-5539(13)00200-9. doi: 10.1016/j.pupt.2013.12.005.

Role of MicroRNAs in Lung Disease.
Angulo M, Lecuona E, Sznajder JI.
Arch Bronconeumol
. 2012 May 16. [Epub ahead of print] English, Spanish

Adenosine triphosphate-dependent calcium signaling during ventilator-induced lung injury is amplified by hypercapnia
Briva A, Santos C, Malacrida L, Rocchiccioli F, Soto J, Angulo M, Batthyany C, Cairoli E, Piriz H.
Exp Lung Res
. 2011 Oct 37 (8) : 471-481


High CO2 levels impair alveolar epithelial function independently of pH.
Briva A, Vadász I, Lecuona E, Welch LC, Chen J, Dada LA, Trejo HE, Dumasius V, Azzam ZS, Myrianthefs PM, Batlle D, Gruenbaum Y, Sznajder JI.
PLoS One. 2007 Nov 28;2(11):e1238.

Grupos auto reconocidos de CSIC.

Sepsis


Disfunción Multiorgánica en la sepsis y protocolos de resucitación precoz.

La sepsis grave y el shock séptico constituyen entidades cuya mortalidad sigue siendo inaceptablemente elevada. La mortalidad general del shock séptico es cercana al 50%. La sepsis involucra una cadena de eventos deletéreos que afectan desde el sistema cardiovascular, la microcirculación y el metabolismo tisular de oxigeno hasta alteraciones celulares vinculadas a procesos tan fundamentales como la respiración mitocondrial.

La depresión miocárdica es una manifestación ya reconocida de la disfunción multiorgánica en la sepsis. Dentro de los mecanismos involucrados en la depresión miocárdica se describen: regulación en menos de receptores ß-adrenérgicos, alteración de la señalización postreceptorial, desacoplamiento de la actividad electromecánica, y la disfunción mitocondrial. El comportamiento del metabolismo miocárdico durante la sepsis ha sido evaluado en diferentes modelos.

Tanto en modelos animales como en pacientes, diversos trabajos han demostrado la importancia de la disfunción mitocondrial en la patogenia de esta alteración. Sin embargo, si bien se han abordado diferentes aspectos de los mecanismos relacionados con la disfunción miocárdica, pocos estudios han abarcado simultáneamente estos aspectos en un mismo modelo in vivo. Asimismo no se han encontrado datos concluyentes sobre la respuesta del metabolismo miocárdico a las medidas de resucitación hemodinámica basada en objetivos, la cual rige actualmente el esquema de resucitación de los pacientes con shock séptico.


INTEGRANTES DEL AREA.

  • Dr. F. Javier Hurtado
  • Dr. Juan Carlos Grignola (MSc-PhD)
    Dr. Nicolas Nin (PhD, actualmente en el Hospital Español, Uruguay)
    Dr. Martín Angulo (MSc student)
    Dra. Alejandra Lopez (MSc)
    Lic. Alicia Da Rosa
    Dr. Manuel Baz
    Dr. Gonzalo Lacuesta
    Dra. Ines Prestes (MSc student)
    Dr. Juan P. Bouchacourt (PhD student)
    Dr. Juan Riva

 

LINEAS DE INVESTIGACION.

1. Sepsis y disfunción multiorgánica. Resuscitación precoz guiada por objetivos y terapias coadyuvantes. F. Javier Hurtado, Juan carlos Grignola, Nicolás Nin, Martín Angulo, Alejandra López, Ignacio Alvez, Leonel Malacrida, Manuel Baz, Gonzalo Lacuesta. Dpto. de Fisiopatología, Dpto. de Anestesiología. Financiación: PDT 2007 - 2010.

2. Analisis de la eficiencia mecano-energetica del ventriculo izquierdo en el shock endotoxico y su respuesta la resucitacion precoz guiada por objetivos. Proyecto de Maestria PRO.IN.BIO Dra. A. Lopez.

3. Disfunción vascular en la sepsis. Dr. Nicolás Nin, Financiación: PDT 2007-2010

 

METOLOLOGIA GENERAL Y PLAN DE TRABAJO.

Se realiza un estudio experimental en un modelo animal de shock endotóxico. Los animales son randomizados en 3 grupos (n=8), un grupo control: Shock endotóxico sin tratamiento de resucitación hemodinámica; grupo SHAM no séptico: instrumentación pero sin administración de endotoxina y finalmente un tercer grupo (RP) de shock endotóxico más resucitación precoz.

A todos los animales se les realiza monitorización hemodinámica invasiva continua, y extracción de muestras de músculo cardíaco para un análisis posterior in vitro del metabolismo miocárdico, a través del estudio de: Consumo miocárdico de oxígeno, Función mitocondrial, y Cuantificación de la carga energética miocárdica. Se obtienen imágenes de microcirculación sistémica para estudio posterior de los cambios tanto cuantitativos como cualitativos de la misma.

Ver materiales.

 

Esquema del protocolo experimental:

 

Esquema protocolo experimental

 

Diagrama del modelo experimental:

MODELO EXPERIMENTAL CERDO

 

Disfuncion microcirculatoria en la sepsis.

Foto 1Foto 2

Disfuncion microcirculatoria en modelo de shock endotoxico. A la izquierda se observa una fotografia de un video obtenido previo al inicio del shock en situacion de estabilidad hemodinamica. A la derecha, durante el mismo experimento, se obtienen imagenes a las 4hs de desarrollado el shock endotoxico. Se evidencia una disminucion notoria de la densidad vascular.

 

Cardiovascular


Tomboembolia Pulmonar y Función Ventricular Derecha
 
 
 
 
 
El tromboembolismo pulmonar (TEP) continúa siendo una entidad subdiagnosticada y letal. Tanto la vasoconstricción neurohumoral como el estrés oxidativo juegan un rol importante en el aumento de la impedancia pulmonar secundaria a la embolia cruórica.
 
 
El levosimendan es un potente vasodilatador activando diferentes tipos de canales de K (canales voltaje dependiente, Ca-dependiente y ATP dependiente) a nivel del músculo liso vascular de diferentes territorios, a la vez que se ha descrito un rol cardioprotector por su acción antioxidante. Nuestro grupo demostró que el levosimendan reduce significativamente el aumento de la poscarga dinámica, atenuando el impacto sobre la función arterial en un modelo ovino de TEP a pesar de la persistencia de la obstrucción mecánica. Dicha reducción fue a expensas de la resistencia vascular, junto con una reducción de la magnitud y retardo de la onda refleja, acompañado de una reducción de la rigidez parietal de la arteria pulmonar.
 
 
Teniendo en cuenta las diferencias anátomoembriológicas (proximal vs. distal) y funcionales (conducción vs. resistencia) del árbol pulmonar dado por las diferencias en los tipos de canales de K presentes en el músculo liso vascular, se plantea: a) caracterizar los mecanismos vasomotores del levosimendan en forma comparativa en anillos aislados de AP proximal y distal de conejos precontraídos con noradrenalina, para lo cual se emplearán agentes bloqueantes de diferentes canales de K (glibenclamida, 4-aminopiridina, tetraetilamonio, iberiotoxina) y b) estudiar los efectos del levosimendan en anillos de AP de conejos sometidos a embolia masiva, con especial hincapié en el estrés oxidativo y nitrosativo.


INTEGRANTES DEL GRUPO

  • Dr. Juan Carlos Grignola (PhD)
    Dra. Camila Beddo (MSc Student)
    Dr. Juan Pablo Bouchacourt (Prof. Adj. Cátedra de Anestesia-HC)
    Dr. Martín Angulo (MSc Student)
    Dr. Eliseo Taranto (MSc)

 

LINEAS DE INVESTIGACIÓN

- Mecánica cardiovascular con énfasis en el ventrículo derecho y la circulación pulmonar.


A nivel Básico (modelos animales):


- Adaptación del VD en la Hipertension Pulmonar Aguda Pasiva y Activa.


- Estudio de los mecanismos de disfunción del VD en el TEP submasivo. (J.C. Grignola Proyecto CSIC I+D 2006)

- Estudio de los efectos vasomotores y sobre el estrés nitro-oxidativo del levosimendan en el árbol vascular pulmonar en un modelo de TEP submasivo. (J.C. Grignola Proyecto CSIC I+D 2009)

- Efectos del levosimendan sobre el estrés oxidativo a nivel mitocondrial del ventrículo derecho y la arteria pulmonar de conejos sometidos a embolia pulmonar masiva. (J.I. Alvez da Cruz y C. Beddo Proyecto presentado a CSIC Iniciacion 2011, Orientador J.C. Grignola)

 

A nivel Clínico:

- Estudio de la remodelación vascular pulmonar mediante IVUS y OCT en pacientes con HAP idiopática y su correlación con el test de vasoreactividad aguda (en colaboración con el Grupo de Hipertensión Pulmonar del Hospital Vall d’Hebron, Barcelona).

- Estudio de los criterios de operabilidad de pacientes portadores de HAP tromboembólica sometidos a endarterectomia pulmonar y su correlación con la hipertensión pulmonar residual y pronóstico (en colaboración con la Unidad de Insuficiencia Cardiaca, transplante cardíaco e Hipertensión Pulmonar, del Depto de Cardiología del Hospital 12 de octubre, Madrid).
 
 
 
 
 

Publicaciones mas relevantes
 

Acute absolute vasodilatation is associated with a lower vascular wall stiffness in pulmonary arterial hypertension.
Grignola JC
, Domingo E, Aguilar R, Vázquez M, López-Messeguer M, Bravo C, Roman A.
Int J Cardiol
. 2011 Jul 23.

Hemodynamic assessment of pulmonary hypertension.
World J Cardiol
. 2011 Jan 26;3(1):10-7.
Grignola JC
.
 
 

Nefrología

Área Fisiopatológica Renal

El objetivo inicial del grupo fue estudiar los mecanismos de progresión de la enfermedad renal crónica (ERC) en modelos animales experimentales: nefrectomía 5/6, uropatía obstructiva bilateral, HTA por infusión de AII. Se evaluó el efecto en ellos de un agente alcalinizante (citrato)e inmunosupresores. Se utilizaron técnicas histológicas, bioquímicas, inmunohistoquímica, evaluación de respiración mitocondrial. Posteriormente se utilizaron cultivos celulares para analizar los mecanismos de acción de la acidosis y endotelina y los efectos protectores del citrato e inmunosupresores. Simultáneamente se desarrolló un estudio de funciones tubulares renales (incluyendo PBPM) y se evaluó el efecto clínico de la corrección de la acidosis metabólica sobre la progresión de la ERC. En los últimos años se desarrolló el modelo de injuria renal aguda por isquemia-reperfusión y endotoxemia.

INTERGRANTES

Dra. Liliana Gadola Bergara
Dr. Oscar Noboa Aldecoa
Dr. José Gabriel Boggia de Izaguirre (DT, MSc-PhD)
Dra. Maria Natalia Marquez Villalba (MSc)
Dr. Nicolas Nin (PhD)
Dra. Leonella Luzardo Domenichelli (MSc)
Dra. Mariana Andrea Seija Alves (MSc)
Dra. Cecilia Baccino Albornos (MSc Student)
Dra. Melania Kurdián (MSc)
Lic. NC. Alicia da Rosa
Dra. Mariana Sottolano (MSc Student)
Dra. Inés Lujambio (MSc Student)
Dr. Sebastián Robaina

 

LINEAS DE INVESTIGACIÓN:

- Progresión de la enfermedad renal y acidosis

- Hipertensión arterial y compromiso renal

- Función tubular renal

- Injuria renal aguda, isquemia-reperfusión

 

PUBLICACIONES MAS RELEVANTES

Melania Kurdián, Inmaculada Herrero-Fresneda, Nuria Lloberas, Pepita Gimenez-Bonafe, Virginia Coria, María T. Grande, José Boggia, Leonel Malacrida, Joan Torras, Miguel A. Arévalo, Francisco González-Martínez, José M. López-Novoa, Josep Grinyó, Oscar Noboa.
Delayed mTOR Inhibition with Low Dose of Everolimus Reduces TGFb Expression, Attenuates Proteinuria and Renal Damage in the Renal Mass Reduction Model
PLoS ONE 7(3): e32516. doi:10.1371/journal.pone.0032516


Boggia J
, Hansen TW, Li Y, Kikuya M, Thijs L, Staessen JA.
Ambulatory Monitoring in Women and Men: It Is Blood Pressure That Matters, Not Heart Rate.

Hypertension. 2011 Apr 25.

CAPACIDADES DEL GRUPO

Estudio de funciones tubulares renales incluyendo determinación de proteinuria de bajo peso molecular por HPLC. (de interés clínico diagnóstico para Nefrología) Cultivo de células tubulares Modelos animales experimentales de nefropatías (nefrectomía 5/6, uropatía obstructiva unilateral, injuria renal aguda por sepsis e isquemia-reperfusión renal e hipertensión arterial por infusión de angiotensina) Estudio de transición epitelio-mesenquimal por inmunohisto y citoquímica y Western blot. Diagnóstico y Tratamiento de formas de Hipertensión Arterial Resistente y Secundaria. Incluyendo estudio de Monitoreo Ambulatorio de Presión Arterial.

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